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淺談小鼠結(jié)腸癌細(xì)胞的傳代方法

更新時(shí)間:2014-06-25      點(diǎn)擊次數(shù):2494
淺談小鼠結(jié)腸癌細(xì)胞的傳代方法
小鼠結(jié)腸癌細(xì)胞培養(yǎng)條件:*培養(yǎng)基:DMEM高糖培養(yǎng)基90%;胎牛血清10%。
小鼠結(jié)腸癌細(xì)胞培養(yǎng)條件:37.0C  carbon dioxide(CO2),5%
小鼠結(jié)腸癌細(xì)胞傳代方法:
收到細(xì)胞后,取出培養(yǎng)瓶在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況。
一、如果細(xì)胞未長(zhǎng)滿,用75%酒精噴灑整個(gè)瓶消毒后放到超菌臺(tái)內(nèi),嚴(yán)格無(wú)菌操作,打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶,吸出培養(yǎng)液,僅留下10ml培養(yǎng)液在瓶?jī)?nèi)繼續(xù)培養(yǎng)。
二、如果細(xì)胞已長(zhǎng)滿,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。具體步驟如下:
1、棄去培養(yǎng)液,用PBS(不含鈣,鎂離子)洗1-2次。
2、加1ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,倒轉(zhuǎn)放于37度培養(yǎng)箱1-3分鐘預(yù)熱,然后又將培養(yǎng)瓶倒轉(zhuǎn)大約30秒后,在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓分散,輕敲幾下培養(yǎng)培養(yǎng)瓶,細(xì)胞隨即脫落下來(lái)。
3、加入6-8ml*培養(yǎng)基,吸出,分到新的培養(yǎng)瓶中。1:3~1:6傳代;2~3天1次。 
小鼠結(jié)腸癌細(xì)胞傳代方法時(shí)需要注意的事項(xiàng):傳代后一半用我們的培養(yǎng)基,一半用你們的,以免細(xì)胞不適應(yīng)而造成生長(zhǎng)不好。
凍存方法:凍存液:基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
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